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最新產(chǎn)品

  • 人白介素6(IL-6)試劑盒

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    價(jià)格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW3708
    • 應用 : 僅供科研使用
    • 保存條件 : 低溫保存
    • 貨期 : 現貨
    • 商品庫存:80
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人白介素6(IL-6)試劑盒

僅供體外研究使用,不用于臨床診斷!
?本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中人可溶性白介素6受體(sIL-6R;CD126)的含量。
?有效期:6個(gè)月
?保存條件:2-8℃

[實(shí)驗原理]

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人可溶性白介素6受體(sIL-6R;CD126)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人可溶性白介素6受體(sIL-6R;CD126)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長(cháng)下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

[樣本處理及要求]

1.  血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2.  血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3.  組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會(huì )影響測量結果),稱(chēng)重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實(shí)驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
4.  細胞培養物上清或其它生物標本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
注:標本溶血會(huì )影響最后檢測結果,因此溶血標本不宜進(jìn)行此項檢測。

[需要而未提供的試劑和器材]

1.酶標儀(450nm)
2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒溫箱
4.蒸餾水或去離子水

[試劑盒組成]


備注:

1.  標準品濃度依次為:160、80、40、20、10、5 pg/mL
2.  經(jīng)過(guò)大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內,實(shí)驗過(guò)程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過(guò)最大標準品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標本進(jìn)行適當稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗。


[注意事項]

1.嚴格按照規定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2.洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。
3.消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
4.底物顯色液應呈無(wú)色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。
5.避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
6.在儲存和溫育時(shí)避免強光直接照射。
7.平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8.任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會(huì )破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
9.不能使用過(guò)期產(chǎn)品。
10.如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

人白介素6(IL-6)試劑盒[試劑準備]

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1:20稀釋?zhuān)?份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

[操作步驟]

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3.  樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿(mǎn)洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長(cháng)處測定各孔的OD值。

[實(shí)驗結果計算]

以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線(xiàn),并得到直線(xiàn)回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。

[試劑盒性能]

1. 檢測范圍:5 pg/mL – 160 pg/mL。
2. 靈敏度:最低檢測濃度小于1.0 pg/mL。
3. 特異性:不與其它可溶性結構類(lèi)似物交叉反應。
4. 重復性:板內變異系數小于10% ,板間變異系數小于15% 。

[說(shuō)明]

1.由于現有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。
2.最終的實(shí)驗結果與試劑的有效性、實(shí)驗者的相關(guān)操作以及當時(shí)的實(shí)驗環(huán)境密切相關(guān),請務(wù)必準備充足的標本備份。
3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會(huì )有少許差別,如:檢測限、靈敏度以及顯色時(shí)間等,請依據試劑盒內說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)驗操作,網(wǎng)站電子版說(shuō)明書(shū)僅作參考。
4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實(shí)驗說(shuō)明才會(huì )得到最佳的檢測結果。
5.本公司只對試劑盒本身負責,不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責,請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預留充足的樣本。
6.使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會(huì )由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導致ELISA實(shí)驗結果偏差。
7.若樣本為細胞培養上清,因該類(lèi)樣本干擾因素較多,如:細胞狀態(tài)、細胞數量、采樣時(shí)間等,所以可能存在檢測不出的情況。
8.某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測出。